氨基酸阐发方式及测试仪器的比力_刘雨
发布时间:2019-07-29   动态浏览次数:

  10 现 代 丝 绸 科 学 取 技 术 2012 年 (第 27 卷 )第 1 期 氨基酸阐发方式及测试仪器的比力 刘 雨 ,蒋 耀 兴 (现 代 丝 绸 国 家 工 程 实 验 室 (苏 州 ) 江 苏 苏 州 215123) 摘要:引见了氨基酸阐发的根基道理及方式,针对日立 L- 8800型取 L- 8900型氨基酸阐发仪正在阐发中的现实 应 用 情 况 ,对 这 两 种 机 型 的 设 备 做 了 比 较 。 环节词:氨基酸阐发仪;比力;日立 L-8800;日立 L-8900 天然界氨基酸 从 要 有 两 种 存 正在 形 式,一 种 是 以 结 合 态 存 正在 于 肽 和 蛋 白 质 中 ,另 一 种 是 以 逛 离 态 存 正在于心理体液、食 品 中。 基 于 氨 基 酸 对 人 类 生 活 沉 要性,氨基酸阐发一 曲 是 分 析 领 域 研 究 沉 要 课 题 之 一 。 氨 基 酸 分 析 正在 蛋 白 质 化 学 、生 物 化 学 、食 品 科 学 等范畴研究中起 着 沉 要 做 用。 因 此,对 氨 基 酸 分 析 方式研究取改良获得人们高度注沉。本文对氨基酸 阐发测定常用方式 进 行 综 述 并 对 L-8800 和 L-8900 进行比力。 1 氨 基 酸 分 析 方 法 的 发 展 氨基酸阐发是现代化饲料工业和食物工业实施 质量节制以及临床医学和生物化学研究范畴必不成 少 的 手 段 ,从 要 包 括 对 组 成 蛋 白 质 和 多 肽 的 22 种 氨 基酸 以 [1,2] 及 众 多 的 生 理 体 液 和 天 然 氨 基 酸 的 分 析。 1954年,Hirs、Moor等 人 较 [3,4] 早 提 出 采 用 磺 酸盐离子互换树脂 分 析 氨 基 酸,并 正在 此 后 几 年 将 此 项技 术 进 一 步 发 展。1958 年,Spackman、Moor、 Stein[5]合做研 制 出 世 界 上 第 一 台 用 离 子 交 换 树 脂 和柱后茚三酮衍生 检 测 法 的 自 动 氨 基 酸 分 析 仪,使 氨基酸定量阐发进入一个崭 新 阶 段。20 世 纪 60 至 80年代,氨基酸阐发的速度、灵 敏 度、自 动 化 程 度 均 大大提高[6,7]。20世纪80年代 中 后 期,柱 前 衍 生 方 法已逐步占领从导 地 位,其 中 激 光 诱 导 荧 光 检 测 器 使用 使检 测 灵 敏 度 提 高 到 一 个 新 的 台 阶 。 [8] 近 年 来,对氨基酸 分 析 引 入 质 谱、核 磁 取 HPLC 联 用 技 术,大大提高定性阐发精确性 。 [9,10] 2 氨 基 酸 分 析 方 法 的 分 类 目前,多 组 分 氨 基 酸 的 分 析 方 法 从 要 有 柱 前 衍 生 液 相 色 谱 法 、离 子 色 谱 法 、柱 后 茚 三 酮 衍 生 色 谱 法 等。氨基酸阐发按 是 否 衍 生 可 分 为 两 大 类:一 类 是 间接阐发法;另 一 类 是 衍 生 化 间 接 分 析 法。 曲 接 分 析法无须进行柱前 或 柱 后 衍 生 反 应,可 以 对 氨 基 酸 间接进行阐发,灵 敏 度 高,操 做 简 单,但 此 类 氨 基 酸 阐发仪价钱昂 贵,专 属 性 强 。 [11,12] 衍 生 化 间 接 分 析 法 指 将 氨 基 酸 衍 生 化 ,接 上 发 光 或 发 色 基 团 ,再 进 行 定性定量阐发。按衍生时间分歧分为柱前衍生法和 柱后衍生法。柱后衍生是将样品组分先经色谱柱分 离 ,再 进 行 衍 生 化 处 理 并 检 测 过 程 。 常 用 衍 生 试 剂 , 如茚三酮、邻 苯 二 甲 醛 。 [13] 其 中,柱 后 茚 三 酮 衍 生 色 谱 法 以 其 技 术 最 为 成 熟 ,具 有 结 果 稳 定 性 好 ,准 确 度较高档特点,成为的最靠得住的方式 。 [14,15] 3L-8800型 取 L -8900 型 氨 基 酸 分 析 仪 的 比力 3.1 氨 基 酸 分 析 原 理 两种 机 型 采 用 相 同 的 分 析 原 理:各 种 蛋 白 质 都 是由20种氨基 酸 首 尾 相 连 组 成 肽 链。 用 水 解 的 方 法将肽链打开,形 成 单 一 的 氨 基 酸 进 行 分 析。 所 有 的氨基酸正在低 pH 值 的 条 件 下 都 带 有 正 电 荷,正在 阳 离 子 交 换 树 脂 上 均 被 吸 附 ,但 吸 附 的 程 度 不 同 ,碱 性 氨 基 酸 结 合 力 最 强 、其 次 为 芳 喷鼻 族 氨 基 酸 、中 性 氨 基 酸、酸性氨基酸 结 合 力 最 弱。 按 照 氨 基 酸 分 析 仪 设 2012 年 (第 27 卷 )第 1 期 现 代 丝 绸 科 学 取 技 术 11 定的洗脱法式,用分歧离子强度、pH 值的缓冲液 依 次将氨基酸按吸附 力 的 不 同 洗 脱 下 来,被 洗 脱 下 来 的氨基 酸 取 茚 三 酮 反 应 液 正在 加 热 的 条 件 下 反 应 (135°),生成可正在分光光度计中570nm 和440nm 检 测到的蓝紫色物质(仲氨生成浅物质 440nm 检 测 )外 标 法 定 量 。 3.2 离 子 交 换 柱 氨基酸阐发仪的核心部件是离子互换柱。氨基 酸阐发仪次要靠它把具有共性而又有不同的各类氨 基酸夹杂物分分开 来 进 行 定 量,所 以 说 离 子 交 换 柱 是氨基酸阐发仪的心净。L-8800和 L-8900两台 仪 器 均 分 别 有 两 根 柱 子 ,一 为 标 准 氨 基 酸 分 析 柱 ,一 为 专做 生 理 体 液 中 氨 基 酸 的 分 离 柱。L-8800 和 L- 8900均采用离 子 交 换 法,分 离 柱 精 细 而 易 堵 塞,对 样 品 的 前 处 理 要 求 高,样 品 需 要 离 心 且 经 过 0.22μm 的微孔过滤膜过滤才能上机。 3.3 反 应 柱 之前 老 型 号 的 仪 器 都 采 用 的 是 反 应 盘 管,正在 传 统的反映圈中样品 带 正在 分 离 时 容 易 扩 散、引 起 沉 叠 效应,液体正在反映 圈 中 流 动 时 中 间 部 位 快、两 边 慢, 从而惹起样品带 的 加 宽,反 应 后 会 产 生 峰 沉 叠。 自 L-8800起头采用的是反映柱,反映柱里面填的 3μm 惰性金刚砂小颗粒,长度为4cm,柱内径为 4.6mm, 通 过 正在 反 应 柱 中 填 充 的 小 颗 粒 ,流 动 相 移 动 平 缓 、流 动 均 匀,无 样 品 带 加 宽 现 象,不 会 产 生 峰 沉 叠。 正在 135°最佳反映温 度 下 大 大 提 高 了 比 表 面 积,使 氨 基 酸 的 衍 生 反 应 更 彻 底 ,从 而 保 证 样 品 正在 高 灵 敏 度 、高 速阐发过程中很好地分手。 3.4 进 样 器 进样器 L-8800是定量环进样体例,样品转移到 定量环里 容 易 制 成 交 叉 污 染 而 变 质。L-8900 采 用 了先辈的间接进样 技 术,这 种 曲 接 进 样 方 式 样 品 不 用转移到定量环 里,进 样 准 确,交 叉 污 染 小,不 易 制 成上机前样品溶液 浓 度 变 化,同 时 使 得 进 样 时 进 样 阀发生的脉动 降 低 到 L-8800A 的 1/7,因 此 进 样 后 5min 内 出 峰 的 样 品 分 离 得 到 改 善 、定 量 更 准 确 。 3.5 泵 L-8800和 L-8900均采用 采 用 双 柱 塞 串 联 往 复 泵 ,此 种 泵 采 用 了 高 速 反 馈 实 时 控 制 技 术 ,最 大 的 优 点是脉动小、流速 稳 定、噪 音 低,所 采 用 的 这 种 泵 可 所供液体流量恒 定、流 速 稳 定。L-8900 泵 的 承 受压力为30kp,比 L-8800 的 20kp 要 高 一 些,能 够 无效防止由于泵升高而对机械形成的损坏。 3.6 氮 气 保 护 气 日立氨基酸阐发仪系统内利用氮气器对缓 冲 液 进 行 隔 离 、对 反 应 液 进 行 保 护 、可 防 止 氧 化 延 长 反映液的利用时间、以 及 避 免 由 于 氧 气 进 入 缓 冲 液 影响个体氨基酸的阐发成果。L-8800A 中正在仪器面 板中手 动 对 N2 的 各 项 功 能 进 行 控 制,L-8900 用 户 能够正在 操 做 系 统 中 对 N2 的 各 项 功 能 进 行 控 制,操 做愈加速速便利。 3.7 冲 溶 液 L-8800持久停泵不开机 时,再 次 使 用 时 需 要 用 拆卸柱子 缓 冲 液 彻 底 冲 洗。L-8900 整 机 增 加 了 第 六 种 缓 冲 液 (蒸 馏 水 ),则 无 需 再 拆 卸 柱 子 进 行 冲 洗 , 只需要用 B1缓冲液进行冲刷,根基处理了此环境。 3.8 脱 气 拆 置 L-8800和 L-8900的整台 机 的 管 和 柱 子 均 比 较 精 细 ,所 用 缓 冲 溶 液 均 需 用 经 过 过 滤 脱 气 ,否 则 会 堵塞分手 柱,L-8800 采 用 的 是 脱 气 瓶 脱 气,L-8900 新 加 入 了 漏 液 传 感 器 ,采 用 的 是 脱 气 机 正在 线 脱 气 ,链 接 多 个 个 通 道 ,脱 气 更 为 彻 底 ,减 少 了 柱 子 堵 塞 的 情 况。 3.9 混 合 器 L-8900中,加 入 了 N2 自 动 鼓 入、N2 压 力 控 制 和 茚 三 酮 的 回 流 保 护 这 三 项 自 动 支 持 功 能 。L-8800 的夹杂器位于分手 柱 的 左 上 方,一 旦 分 离 柱 出 现 问 题时,溶液会 出 现 倒 吸 现 象;而 L-8900 的 混 合 器 位 置 低 于 分 离 柱 ,有 效 避 免 了 倒 吸 现 象 。 3.10 分 析 软 件 L-8800采用的是日立公 司 自 己 的 处 理 软 件,而 L-8900采用的是通用的液相 软 件,从 要 是 便 于 仪 器 进 行 计 量 校 正。 另 外 L-8800A 的 操 做 系 统 是 ASM,而 L-8900 采 用 的 是 EZChromElite 控 制 软 件,具有更丰硕的 谱 图 处 理 参 数、定 量 方 法、更 丰 富 的系统顺应性尺度和更人道化的演讲模式。 4 氨 基 酸 分 析 仪 的 应 用 氨基 酸 是 组 成 蛋 白 质 的 基 本 单 元,具 有 极 其 沉 要的心理 功 能。 氨 基 酸 的 检 测 分 析 广 泛 应 用 于 农 业 、食 品 、饲 料 、医 药 、化 妆 品 等 取 人 类 生 活 和 健 康 密 切 相 关 的 几 大 行 业 ,已 成 为 我 国 科 学 领 域 中 必 不 可 少的一种检测手段。 4.1 农 业 、食 品 行 业 上 的 应 用 各类农做物的果实都含有必然数量的卵白质, 氨基酸阐发仪对玉 米、小 麦 等 农 做 物 的 氨 基 酸 含 量 12 现 代 丝 绸 科 学 取 技 术 2012 年 (第 27 卷 )第 1 期 进行检测是十分无效的。正在食物检测阐发中氨基酸 分 析 可 为 强 化 食 品 提 供 可 靠 的 依 据 ,可 准 确 对 果 汁 、 饮料进行的辨别。茶氨酸被认为是茶叶的特征 氨 基 酸 ,属 酰 胺 类 化 合 物 ,占 一 般 茶 叶 中 逛 离 氨 基 酸 的40% 以 上,占 干 茶 沉 的 1% ~2% 。 [16] 正在 国 内 茶 叶工做者一曲茶氨酸的含量取茶叶质量和品级 有间接关系,所以通 过 检 验 测 定 茶 氨 酸 来 鉴 别 实 伪 茶叶。 我们 每 天 生 活 所 用 的 酱 油、醋 中 都 含 有 一 定 数 量的氨基酸成分。酱油中次要的含氮成分是逛离氨 基酸及肽,其 中 逛 离 氨 基 酸 占 50% ~ 75%。 氨 基 酸 既 是 酱 油 的 从 要 营 养 成 分 ,也 是 从 要 的 呈 味 物 质 , 其构成成 分 和 比 例 曲 接 影 响 酱 油 的 品 质 。 [17] 国 家 对酱油 级 别 的 认 定 为 一 级 酱 油 每 100mL 中 含 有 700mg 氨 基 酸 成 分 ,400mg 以 下 的 为 劣 等 酱 油 。 4.2 饲 料 行 业 上 的 应 用 各类饲料均由分歧品种原料按必然比例设置装备摆设而 成,此中必需氨基酸 的 含 量 和 它 们 之 间 的 比 例 必 须 得当,才能满脚 畜 禽 身 体 合 成 蛋 白 质 的 需 要。 利 用 氨基酸阐发仪测定 原 料 和 产 品 中 的 氨 基 酸 含 量,对 产质量量进行监视 以 达 到 保 证 质 量 的 目 的,同 时 又 防止伪劣产物进入市场。 蛋氨 酸 正在 植 物 性 蛋 白 质 中 含 量 少,要 使 禽 类 羽 毛 丰 满 ,需 要 正在 饲 料 中 添 加 脚 够 的 蛋 氨 酸 (含 硫 氨 基 酸 )。 市 场 上 的 蛋 氨 酸 的 饲 用 级 制 剂 有 几 种 :单 位 体 蛋氨酸(甲硫氨酸)中蛋氨酸的含量 98.5%;羟基蛋 氨酸钙是羟基蛋 氨 酸 的 钙 盐,含 量 >97%;N- 羟 甲 基蛋氨酸钙含蛋氨酸 67.7%,能防止蛋氨酸颠末瘤 胃 时 被 破 坏 ,保 证 奶 牛 对 蛋 氨 酸 的 利 用 ,从 而 提 高 产 奶量取繁衍力。操纵氨基酸阐发仪很容易就能够区 别其 品级 。 [18] 4.3 医 学 上 的 应 用 人们常称卵白质为生命的载体。卵白质正在人体 内 并 不 能 曲 接 被 利 用 ,人 体 消 化 酶 的 做 用 ,将 高 分 子 卵白质分化为低分 子 的 多 肽 或 氨 基 酸 后,正在 小 肠 内 被接收。人体内氨 基 酸 代 谢 处 于 动 态 平 衡 状 态,利 用这些氨基酸再合成本身的卵白质。人体对卵白质 的需要现实上是对氨基酸的需要。由此氨基酸是生 命的第一要素,氨基 酸 检 测 正在 医 学 领 域 就 显 得 十 分 主要。 蒋滢,蒋菊喷鼻等人 正在 [19] 文中 对 肝 性 脑 病 的 氨 中 毒 学 说 、肝 性 脑 病 的 假 神 经 递 质 学 说 、肝 性 脑 病 的 血 浆氨基酸失衡学 说 及 肝 性 脑 病 的 γ-氨 基 丁 酸 (GA- BA)的诱 因 和 结 果 进 行 比 较,利 用 氨 基 酸 分 析 手艺从氨基酸代谢非常角度阐述了氨基酸取肝性脑 病的关系。 莉 正在 [20] 文 中 利 用 氨 基 酸 分 析 仪 对 低 智 儿 童血清中18 种逛离氨基酸进行了测定,成果显示患 儿血清 中 11 种 逛 离 氨 基 酸 (TAU,SER,VAL, MET,ILE,LEU, TRY,PHE, ORN, LYS, TRP)降低。氨基酸的 失 衡 严 沉 的 影 响 了 儿 童 蛋 白 质合 成,导 致 大 脑 的 分 化,发 育 受 阻,引 起 智 力 低 下。 琳、王 彦 斌 等 [21] 人 《人 胃 癌 组 织 及 胃 正 常 组织氨基酸的差别 研 究》一 文 中 利 用 氨 基 酸 分 析 检 测 技 术 对 22 例 胃 癌 组 织 及 其 癌 边 组 织 、胃 正 常 组 织 氨基酸进行了测定。发觉胃癌组织氨基酸总量低于 癌边组织氨基酸总 量,癌 边 组 织 氨 基 酸 总 量 又 低 于 胃一般组织氨基酸总量。癌中组织取癌边组织比拟 有8种氨基酸较着 降 低,结 果 表 明 胃 癌 组 织 存 正在 明 显的氨基酸代谢异 常,探 讨 了 肿 瘤 组 织 氨 基 酸 代 谢 的变化纪律。 参考文献: [1]HaoB,GongW,FergusonTKetal.AnewUAG-encodedresi- dueinthestructureofamethanogenmethyltransferase[J]. 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(下 转 第 25 页 ) 2012 年 (第 27 卷 )第 1 期 现 代 丝 绸 科 学 取 技 术 25 的灯光道具。风趣 的 声 动 效 果,正在 橱 窗 中 安 拆 声 控 的欢送语,如欢送 光 临、欢 送 惠 顾 等,当 顾 客 走 近 时 就 可 即 时 听 到 ,产 生 入 店 兴 趣 。 反 常 的 处 理 手 法 ,男 拆商品陈列时插手 一 些 女 性 的 解 体 模 型,从 而 男 拆 被陪衬得愈加伟岸。 4 结 语 综 上 所 述 ,橱 窗 做 为 品 牌 风 格 表 现 的 中 心 ,反 映 产 品 的 风 格 、目 标 和 价 格 的 定 位 ,同 时 橱 窗 也 是 树 立 品牌抽象并首个取客户交换的路子。商场橱窗是商 场 免 费 向 消 费 者 宣 传 、展 示 精 美 商 品 的 最 好 阵 地 ,承 载着商品展现和信 息 传 达 的 沉 要 任 务,是 折 射 人 们 图 9 男 拆 生 活 行 为 展 示 橱 窗 3.7 吸 引 目 光 法 正在橱窗色彩取形态的处置上必需具有强无力的 视觉冲击力 以 及 新 鲜、独 特 的 创 意,转 为 有 意 识 注 意,能敏捷捕 消 费 者 的 目 光,引 起 视 觉 兴 奋,留 下深刻的印象。为 了 达 到 这 一 目 的,陈 列 可 以 以 下 一 些 设 计 方 法 :新 颖 的 服 拆 姿 态 构 成 ,普 通 的 服 拆 陈 列形式是 用 模 特 穿 着 出 样。 可 以 改 变 它 的 陈 列 形 社会糊口的一面 镜 子。 因 此,它 必 须 具 备 强 烈 的 视 觉冲击力,去震动 消 费 者,召 唤 和 感 动 消 费 群,使 顾 客 产 生 同 感 ,激 发 他 们 的 购 买 欲 望 ,充 当 消 费 者 塑 制 个性和表现社会地位的参谋。所以国内男拆品 牌应改变目前橱窗 陈 列 中 表 现 出 的 尴 尬 现 状,正在 陈 列设想中应注沉橱窗陈列!使用多沉橱窗陈列方式 和 技 巧 ,使 得 橱 窗 陈 列 促 进 品 牌 的 销 售 ,提 高 品 牌 社 会抽象。 式 ,如 用 绳 子 悬 挂 出 样 ,自 然 下 搭 ,用 衣 服 组 成 图 案 。 夸张处置的笼统道具取文字图形。现正在较时髦的解 构模 特,畸 形 模 特,陶 艺 做 品,玻 璃 制 品,家 具 产 品 等。背板强烈色块 的 对 比,可 使 用 色 彩 构 成 等 原 理 陪衬服拆。特殊灯 光 的 运 用,后 背 板 可 使 用 拆 饰 性 灯 光 ,服 拆 照 明 可 使 用 沉 点 灯 光 ,也 可 采 用 一 些 奇 怪 参考文献: [1]杨大筠编著.卖场陈列———无声的促销[M].:中国 纺 织 出 版 社 ,2006:50. 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